O teste de PCR (reação em cadeia da polimerase) é uma tecnologia central no diagnóstico molecular. A padronização de seus processos de embalagem e teste afeta diretamente a precisão e a biossegurança dos resultados. Este artigo fornece uma perspectiva profissional sobre os principais pontos de controle da qualidade ao longo do processo de teste de PCR.
O recibo e o pré -tratamento da amostra são os primeiros passos do processo. Os laboratórios devem verificar estritamente a identificação da amostra, as condições de transporte e o tempo de armazenamento para garantir a integridade da amostra. Após o recebimento, as amostras devem ser numeradas e registradas em um gabinete de biossegurança e passam por procedimentos de processamento pre -, como lise e extração de ácido nucleico com base no tipo de teste. Um sistema de verificação de pessoas de duas - é necessário durante este estágio para evitar a contaminação cruzada -.
A preparação do sistema de reação de PCR deve ser realizada dentro de um banco limpo. Os operadores devem usar equipamentos de proteção de nível 3 e usar nuclease - consumíveis livres. A preparação do reagente adere ao princípio do fluxo de trabalho "unidirecional", passando da área de preparação do reagente para a área de processamento da amostra e depois para a área de amplificação. Controles negativos, controles positivos e controles internos devem ser incluídos em cada lote de reação para monitorar a validade experimental.
Durante a fase de amplificação e teste, o instrumento de PCR deve ser pré -verificado - parâmetros calibrados e de ciclagem de temperatura. O procedimento de reação normalmente inclui três etapas: desnaturação (94 - 95 graus), recozimento (50-65 graus) e extensão (72 graus). O número de ciclos é ajustado com base no alvo de detecção. A PCR de fluorescência em tempo real também requer monitoramento do limiar de sinal de fluorescência de canais específicos.
A análise e os relatórios de resultados devem ser realizados por técnicos qualificados. Os dados brutos devem ser revisados por pelo menos dois profissionais para confirmar a morfologia da curva de amplificação, a plausibilidade do valor da TC e a conformidade dos materiais de controle de qualidade com os padrões. O relatório final deve incluir informações sobre a metodologia de teste, a base para a interpretação dos resultados e uma declaração de limitações de teste.
Todo o processo adere estritamente à ISO 15189 e especificações relevantes do CDC. Um sistema de garantia tripla de monitoramento ambiental, manutenção de equipamentos e treinamento de pessoal é implementada para garantir a confiabilidade e a rastreabilidade dos testes de PCR.